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接种菌悬液培养方式对纺织品抗菌试验的影响

           接种菌悬液培养方式对纺织品抗菌试验的影响
                                张红利  刘会  蒋芳
                   (陕西西安纤维纺织品监督检验所)
    摘要:探讨纺织品抗菌性能检测中接种菌悬液的培养方式对抗菌试验的影响。分析了接种菌悬液浓度与试验有效性的关系,分别采用振荡培养和静止培养方式制取金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬液,通过对比所制得接种菌悬液的浓度,认为在接种量相同的情况下,采用静置培养所得的金黄色葡萄球菌的接种菌悬液浓度符合标准要求,而采用振荡培养所得的大肠杆菌的接种菌悬液符合标准要求。
    关键词:静置培养;振荡培养;接种菌悬液;有效性;细菌浓度 
    中图分类号:TS107文献标志码:A文章编号:1001-7415(2011)01-0030-02  
    近年来,抗菌纺织品备受人们青睐,各种抗菌产品层出不穷,对纺织品的抗菌性能进行准确的检测和科学评价,对抗菌纺织品的良性发展尤为重要。我国在2008年就已发布了纺织品抗菌性能的检测和评价标准(GB/T 20944.3),在依照标准检测的过程中,我们采取了振荡培养和静置培养两种培养条件培养制取接种菌悬液,发现不同培养条件会对接种菌悬液浓度造成一定影响,而接种菌悬液浓度过大或过小都会导致试验无效,使试验数据过分偏离真实值,从而对试验有效性有一定影响。所以接种菌悬液的细菌浓度应与标准所要求的浓度相接近。
    1·细菌浓度与试验有效性的关系
    GB/T 20944.3—2008《纺织品抗菌性能评价第三部分:振荡法》中将制备好的接种菌悬液经过4次10倍稀释,再取5 mL含微量营养物的稀释液将其接种到纺织品萃取液中振荡培养18 h后观察其增长倍数。在测试中,对于金黄色葡萄球菌和大肠杆菌,标准要求对照样的试验增长值F大于1.5时试验方为有效,即要求18 h振荡中细菌的增长倍数大于1×101.5倍。而制备好的接种菌悬液经过4次10倍稀释,接种就使得一定数目的细菌由营养丰富的培养基接种到营养相对比较贫乏的培养基中。接种菌悬液浓度大,细菌接种量大,在18 h培养过程中停滞期短,易达到有效性要求的增长倍数。接种菌悬液浓度小,细菌接种量小,在18 h培养过程中停滞期长,不易达到试验有效性要求的增长倍数,易导致试验无效。细菌的生长繁殖需吸收营养合成细胞组分,由于细菌在大量生长繁殖过程中会消耗营养致使一定容积的培养基浓度降低。同时代谢产物大量积累会对菌体本身产生毒害,pH值、氧化还原电位等均有所改变,溶解氧供应不足。这些因素均对细菌生长不利,使细菌的生长速率下降甚至到零,死亡速率增加进入静止期。所以一定的营养物质中,细菌繁殖时,接种菌悬液浓度不宜过大。从以上综合分析来看,接种菌悬液浓度过大或过小都会导致试验无效。
    2·试验
    2.1试验仪器及材料
    试验仪器:BHC-1000ⅡA/B3型二级生物安全柜,LRH-150F型生化培养箱,HD500型水浴振荡器,PXQ-L5-30-Ⅱ型高压灭菌锅。
    营养肉汤:牛肉膏3 g,蛋白胨5 g,蒸馏水1 000 mL。
    营养琼脂培养基:牛肉膏3 g,蛋白胨5 g,琼脂粉15 g,蒸馏水1 000 mL。
    0.03 ml/L PBS磷酸盐稀释液:磷酸氢二钠2.84 g,磷酸氢二钾1.36 g,蒸馏水1 000 mL。
    2.2试验方法
    (1)从保存菌种试管中取一接种环细菌,在营养琼脂平板上划线,于(37±1)℃培养18 h~24 h。
    (2)用接种环从平板中挑取一典型菌落,接种于20 mL营养肉汤中。置于HD500型水浴振荡器中,温度(37±1)℃,130 r/min,振荡培养18 h~24 h。
    (3)用接种环从平板中挑取一典型菌落,接种于20 mL营养肉汤中。置于LRH-150F型生化培养箱中,温度(37±1)℃,静置培养18 h~24h。
    (4)将(2)和(3)所得培养物稀释,取不同稀释度的菌液1 mL放到平皿中,倒入琼脂,待凝固后,倒置平皿并置于生化培养箱中,温度(37±1)℃培养24 h~48 h。记录有效平板中的菌落数。
    2.3试验结果及分析
    试验结果见表1和表2。
             
             
    标准中要求接种菌悬液的具体浓度范围在1×109cfu/mL~5×109cfu/mL时,测试结果为有效。对于金黄色葡萄球菌,从表1可知,采用静置培养所得的接种菌悬液浓度符合标准要求,而采用振荡培养所得菌悬液浓度小于标准要求。接种菌悬液浓度小,细菌接种量小,在18 h培养过程中停滞期长,不易达到试验有效性要求的增长倍数,易导致试验无效。而对于大肠杆菌,从表2可知采用振荡培养所得的接种菌悬液浓度符合标准要求,而采用静置培养所得菌悬液浓度小于标准要求。
    3·结论
    影响纺织品抗菌性能检测试验的因素很多,有试验温度、溶液pH值、溶液中溶解氧的含量、溶液中营养物质含量、接种菌悬液浓度等。由于培养方式会对接种菌悬液浓度有较大影响,故而培养方式对试验的有效性有一定影响。对于金黄色葡萄球菌,采用静置培养符合试验要求,采用振荡培养会使接种菌悬液浓度小于标准要求,易导致试验无效,故应采用静置培养。而对于大肠杆菌,采用振荡培养符合试验要求,采用静置培养会使接种菌悬液浓度小于标准要求,易导致试验无效,故应采用振荡培养。   
    参考文献: 
    [1]翟震宇.我国针织物抗菌性能测试标准的比较[J].针织工业,2009(3):67-68.
    [2]周群英,高廷耀.环境工程微生物学[M].2版.北京:高等教育与出版社,2000:6-118.
    [3]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,中国国家标准化管理委员会.GB/T 20944.3—2008纺织品抗菌性能评价[S].北京:中国标准出版社,2008.


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